摘要

目的: 通過觀察高膽汁酸血癥狀態(tài)下家兔支氣管肺泡灌洗液表面張力的變化以及膽汁稀釋液和5種不同游離膽汁酸在體外對(duì)家兔支氣管肺泡灌洗液表面張力的影響，為認(rèn)識(shí)膽汁酸調(diào)節(jié)呼吸功能提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

方法: 30只新西蘭雄性大白兔，使用0.9%生理鹽水做支氣管肺泡灌洗，肺泡灌洗液進(jìn)行表面張力測(cè)定。實(shí)驗(yàn)一組測(cè)定高膽汁酸血癥家兔動(dòng)物模型肺泡灌洗液表面張力的變化；實(shí)驗(yàn)二組比較了生理鹽水與不同稀釋度膽汁液表面張力及對(duì)肺泡灌洗液表面張力的影響；實(shí)驗(yàn)三組比較了5種不同游離膽汁酸水溶液表面張力及對(duì)支氣管肺泡灌洗液表面張力的影響。

結(jié)果: (1)高膽汁酸血癥狀態(tài)下家兔動(dòng)物模型肺泡灌洗液表面張力與對(duì)照組相比明顯升高(P<0.05)；(2)支氣管肺泡灌洗液中加入不同稀釋度(1:15、1:10、1:5)的膽汁稀釋液，肺泡灌洗液表面張力就增加了21.15%、26.09%、19.64%(P<0.001)；(3)5種游離膽汁酸水溶液中UDCA對(duì)支氣管肺泡灌洗液表面張力沒有明顯影響(P>0.05)，其他4種游離膽汁酸都可以升高支氣管肺泡灌洗液表面張力(P<0.001)，CDCA增加了16.10%，CA增加了21.66%，LCA增加了14.21%，DCA增加了13.05%。

結(jié)論: 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高膽汁酸血癥狀態(tài)下，肺泡灌洗液表面張力明顯升高。體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明膽汁稀釋液可以增加支氣管肺泡灌洗液的表面張力；5種游離膽汁酸水溶液中除UDCA外其他4種游離膽汁酸都可以升高支氣管肺泡灌洗液表面張力，說明這四種游離膽汁酸可能可以通過乳化肺泡表面活性物質(zhì)，增加了肺泡表面張力，影響呼吸功能。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、藥品與方法

新西蘭雄性大白兔30只，體質(zhì)量在2.0~2.5kg之間，每組10只，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK(粵)2011-0015。藥物鵝脫氧膽酸(CDCA)、脫氧膽酸(DCA)、膽酸(CA)、石膽酸(LCA)和熊脫氧膽酸(UDCA)由上海一基化學(xué)試劑公司提供。

①高膽汁酸血癥家兔動(dòng)物模型制作：用1:10稀釋度膽汁液10ml耳緣靜脈注射，當(dāng)呼吸功能明顯加強(qiáng)加快時(shí)立即空氣栓塞至死，手術(shù)收集肺泡灌洗液，收集方法如②；

②支氣管肺泡灌洗液的收集：動(dòng)物空氣栓塞至死，立即手術(shù)，取出氣管及左右肺，由氣管注入0.9%生理鹽水50ml做肺泡灌洗，反復(fù)3次，抽吸肺泡灌洗液40ml左右，放置5min用于表面張力測(cè)定。采集過程中肺泡灌洗液不得有血跡污染；

③表面張力的測(cè)定：采用芬蘭Kibron公司生產(chǎn)的Delta-8全自動(dòng)高通量表面張力儀測(cè)定肺泡灌洗液的表面張力。將靜置5分鐘后的灌洗液樣本注入儀器專用96孔測(cè)試板中，每孔加入50 μL樣液，使表面活性物質(zhì)充分分布均勻。該儀器基于最大拉力法（du Noüy-Padday法）進(jìn)行測(cè)量：通過高精度微量天平監(jiān)測(cè)金屬探針從液面拉脫時(shí)所需的最大力，自動(dòng)計(jì)算并直接輸出表面張力值（測(cè)量范圍：10–100 mN/m，精度：±0.2 mN/m）。測(cè)量前需對(duì)96孔板進(jìn)行預(yù)處理，確保無油脂、洗滌劑等活性物質(zhì)殘留；儀器在每次測(cè)量前后自動(dòng)加熱清洗探針（1000℃），避免交叉污染。全部樣品測(cè)量過程約3分鐘內(nèi)完成，系統(tǒng)自動(dòng)記錄并分析數(shù)據(jù)。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組

①高膽汁酸血癥家兔動(dòng)物模型肺泡灌洗液表面張力的變化：(A)耳緣靜脈注射0.9%生理鹽水10ml，獲取的支氣管肺泡灌洗液，進(jìn)行表面張力的測(cè)定，作為對(duì)照組；(B)耳緣靜脈注射1:10稀釋度膽汁液10ml，獲取的支氣管肺泡灌洗液，進(jìn)行表面張力的測(cè)定；②不同稀釋度膽汁液表面張力及對(duì)肺泡灌洗液表面張力的影響。(A)生理鹽水組：測(cè)定0.9%生理鹽水表面張力作為對(duì)照；(B)膽汁稀釋液組：1ml兔的膽囊膽汁經(jīng)0.9%生理鹽水按1:15、1:10(C)、1:5(D)稀釋，測(cè)其混合溶液的表面張力；(E)支氣管肺泡灌洗液組：對(duì)獲取的支氣管肺泡灌洗液，進(jìn)行表面張力的測(cè)定，作為對(duì)照；(F)膽汁稀釋液加肺泡灌洗液組：支氣管肺泡灌洗液中分別加入1:15、1:10(G)、1:5(H)膽汁稀釋液各1ml，混合，對(duì)其混合溶液進(jìn)行表面張力的測(cè)定；③5種不同游離膽汁酸水溶液表面張力及對(duì)支氣管肺泡灌洗液表面張力的影響：(A)生理鹽水組：測(cè)定0.9%生理鹽水表面張力作為對(duì)照；(B)5種不同游離膽汁酸水溶液組：用0.9%生理鹽水、適量麥芽糖糊精配置CDCA、DCA、CA、LCA和UDCA5種單品水溶液，終濃度分別為2mg/ml；測(cè)定其水溶液的表面張力；(C)支氣管肺泡灌洗液組：對(duì)獲取的支氣管肺泡灌洗液，進(jìn)行表面張力的測(cè)定，作為對(duì)照；(D)5種不同游離膽汁酸水溶液加肺泡灌洗液組：支氣管肺泡灌洗液中分別加入5種不同游離膽汁酸水溶液各1ml，混合，對(duì)其混合溶液進(jìn)行表面張力的測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS17.0軟件進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，P<0.05表明差異有顯著性。