一、配件型號(hào)基礎(chǔ)說(shuō)明

1. Kibron原廠(chǎng)產(chǎn)品目錄中，沒(méi)有出廠(chǎng)成套的“厭氧密封樣品杯”標(biāo)準(zhǔn)套件，無(wú)官方SKU編號(hào)的密封杯蓋、厭氧密封墊圈組件。常規(guī)樣品杯為敞口設(shè)計(jì)，用于普通液相張力測(cè)試，直接測(cè)試厭氧發(fā)酵菌液會(huì)接觸空氣，氧化揮發(fā)性代謝物、改變菌液界面活性物質(zhì)，造成曲線(xiàn)漂移失真。

2. 適配EZ?Pi Plus / AquaPi Plus單通道機(jī)型的原廠(chǎng)樣品杯物料編號(hào)。

PTFE材質(zhì)樣品杯，貨號(hào)3640，單只包裝，容積3mL，耐發(fā)酵液酸堿腐蝕，適合厭氧改造使用。

PP一次性樣品杯，貨號(hào)3523，10只套裝，一次性使用，避免交叉污染，不適合長(zhǎng)時(shí)間厭氧動(dòng)態(tài)測(cè)試。

玻璃樣品杯，原廠(chǎng)無(wú)公開(kāi)獨(dú)立SKU，需要向代理商定制訂貨。

3. 適配DeltaPi / DeltaPi?4多通道機(jī)型。

選用C型全PTFE帶進(jìn)樣口多孔板，原廠(chǎng)配件，單孔容積150?1300μL，該多孔板本體帶有開(kāi)孔，可外接氣路，適合搭建厭氧氣氛環(huán)境，無(wú)配套原裝密封上蓋，需要二次密封改造。

4. Delta?8高通量96孔機(jī)型。

原廠(chǎng)DynePlates貨號(hào)8650聚丙烯微孔板，完全敞口，沒(méi)有原廠(chǎng)厭氧密封配件，該機(jī)型不適合做長(zhǎng)時(shí)間厭氧動(dòng)態(tài)張力測(cè)試，僅適合短時(shí)間快速取樣測(cè)定。

二、厭氧密閉樣品杯改造配件選型（非原廠(chǎng)，實(shí)驗(yàn)室可復(fù)現(xiàn)）

1. 針對(duì)貨號(hào)3640 PTFE 3mL樣品杯改造。

密封蓋主體選用PTFE材質(zhì)加工蓋，中心預(yù)留探針穿過(guò)小孔，孔徑略大于DyneProbe探針外徑；配套丁基橡膠隔墊，隔墊中心薄化，探針可以穿刺穿過(guò)，保證探針上下運(yùn)動(dòng)同時(shí)腔體密閉；側(cè)面預(yù)留2個(gè)小接頭，用于通入高純氮?dú)庵脫Q杯內(nèi)氧氣。整套改造件可以委托機(jī)加工按照3640樣品杯外徑尺寸定制。

2. 密封輔助耗材。

PTFE密封墊圈，用于杯體和密封蓋之間法蘭密封；微量氣體針閥2個(gè)，一路氮?dú)膺M(jìn)氣，一路出氣；無(wú)氧操作手套箱或者厭氧工作站，用于菌液分裝上樣。

三、完整可復(fù)現(xiàn)厭氧發(fā)酵菌液Kibron測(cè)試操作流程

1. 儀器前期準(zhǔn)備

儀器放置無(wú)震動(dòng)、無(wú)直吹氣流臺(tái)面，整機(jī)通電預(yù)熱60min。DyneProbe探針依次超純水沖洗、無(wú)水乙醇沖洗，氮?dú)獯蹈伞?5℃超純水做張力校準(zhǔn)，純水張力穩(wěn)定72.0?72.8mN/m，通道偏差小于0.2mN/m。將改造完成的密閉樣品杯組件安裝在儀器溫控樣品臺(tái)，檢查全部氣路接頭，確認(rèn)無(wú)漏氣。

2. 氧氣空白驗(yàn)證

密閉樣品杯內(nèi)部加入?yún)捬蹩瞻拙彌_液，裝配密封蓋，開(kāi)啟氮?dú)猓刂频土魉俪掷m(xù)吹掃5?10min置換腔體內(nèi)部空氣，關(guān)閉出氣閥維持微弱正壓。連續(xù)采集30min表面張力曲線(xiàn)，曲線(xiàn)無(wú)漂移、無(wú)明顯波動(dòng)，證明密封改造合格，沒(méi)有氧氣滲入，方可開(kāi)展菌液樣品測(cè)試。如果基線(xiàn)持續(xù)漂移，檢查隔墊、墊圈密封性，重新調(diào)整。

3. 厭氧菌液上樣操作

全部上樣操作在厭氧工作站內(nèi)部完成。取貨號(hào)3640的PTFE樣品杯，在厭氧環(huán)境下轉(zhuǎn)移180?220μL厭氧發(fā)酵菌液，沿杯壁緩慢加入，嚴(yán)禁產(chǎn)生氣泡。將樣品杯轉(zhuǎn)移到儀器溫控臺(tái)，快速裝配PTFE密封蓋、丁基橡膠穿刺隔墊，探針穿過(guò)隔墊中心位置，保證探針僅接觸液面，隔墊不能擠壓探針。連接氮?dú)鈿饴罚瑪Q緊全部密封部位。

4. 氣氛置換與平衡

通入高純氮?dú)猓土魉俅祾??12min，置換杯內(nèi)殘留空氣，之后調(diào)小氮?dú)饬髁浚S持腔體內(nèi)部微正壓，避免外界空氣反向滲入。關(guān)閉儀器防風(fēng)罩，樣品在設(shè)定測(cè)試溫度下靜置平衡10?15min，消除上樣擾動(dòng)，等待液面穩(wěn)定。全程禁止大流量氮?dú)庵贝狄好妫瑲饬鳑_擊會(huì)造成張力讀數(shù)劇烈波動(dòng)。

5. 上機(jī)采集測(cè)試

軟件設(shè)置時(shí)間掃描模式，設(shè)定測(cè)試溫度，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求設(shè)置采集時(shí)長(zhǎng)，采集間隔2?5秒每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，探針浸入深度0.3mm，探針下降速度2mm/min。確認(rèn)探針正常接觸菌液液面，啟動(dòng)采集，全程維持氮?dú)馕⒄龎海坏貌鹦睹芊饨M件。

6. 樣品切換與清洗

測(cè)試結(jié)束，停止通氣，在厭氧環(huán)境下拆卸密封蓋，取出樣品杯。探針超純水多次沖洗，乙醇沖洗，高純氮?dú)獯蹈伞TFE樣品杯使用稀酸?純水依次清洗，烘干備用。丁基橡膠隔墊屬于消耗件，多次穿刺后密封性能下降，建議每2?3個(gè)樣品更換一片隔墊。

四、關(guān)鍵細(xì)節(jié)與質(zhì)量控制

1. 厭氧發(fā)酵菌液含有微生物、揮發(fā)性有機(jī)酸、硫化物，一旦接觸氧氣，組分發(fā)生改變，表面張力曲線(xiàn)持續(xù)漂移，密封和氮?dú)庵脫Q步驟不能省略。

2. 氮?dú)饬魉賴(lài)?yán)格控制，禁止高速氣流直吹液面，氣流擾動(dòng)會(huì)引入巨大測(cè)試噪音。腔體維持微正壓，而不是高壓，防止密封蓋被頂開(kāi)漏氣。

3. 丁基橡膠隔墊反復(fù)穿刺后會(huì)出現(xiàn)微小縫隙，氧氣會(huì)滲入，不能無(wú)限次重復(fù)使用。

4. 不建議使用Delta?8高通量機(jī)型做長(zhǎng)時(shí)間厭氧動(dòng)態(tài)測(cè)試，該機(jī)型無(wú)原廠(chǎng)密閉配件，96孔板很難實(shí)現(xiàn)有效的無(wú)氧密封，適合厭氧箱內(nèi)取樣后快速短時(shí)檢測(cè)。

5. 每次實(shí)驗(yàn)必須同步做厭氧空白介質(zhì)對(duì)照，排除氣路、密封組件帶來(lái)的基線(xiàn)漂移。

6. 發(fā)酵菌液存在菌體沉淀，測(cè)試前厭氧條件下輕柔混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生氣泡，氣泡會(huì)直接干擾張力數(shù)據(jù)。

免責(zé)聲明：本實(shí)驗(yàn)方案僅為芬蘭 Kibron 儀器的參考操作流程，不替代設(shè)備原廠(chǎng)說(shuō)明書(shū)與官方操作規(guī)范，配件選型、樣品測(cè)試結(jié)果受樣品基質(zhì)、改造配件、實(shí)驗(yàn)環(huán)境、人員操作等多重因素影響，本方案不對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠性、配件適配性承擔(dān)責(zé)任。